一类新药非拉尼特

新药类别：非拉尼特是我科自己合成的、具有心血管活性的新化合物，属于创新药物-国家一类新药。
项目来源：《一类新药非拉尼特的研究》是国家新药研究基金资助课题（课题编号96-901-05-243）；《非拉尼特的制备工艺》已获得国家发明专利（专利号ZL 99 1 19659.7）。

（一）、非拉尼特的研究进展（现已完成的工作）

1．非拉尼特原料药的合成工艺、结构鉴定

非拉尼特的化学名称为N-（2-羟乙基）阿魏酸胺硝酸酯，经元素分析、红外吸收光谱（IR）、紫外吸收光谱（UV）、核磁共振氢谱（¹HNMR）、核磁共振碳谱（¹³CNMR）、质谱、热分析、粉末X衍射分析等项试验，确证了非拉尼特的化学结构。其性状为白色晶体，无味，溶于丙酮，在乙醇中微溶，不溶于水。熔点为136～138℃。分子式为C₁₄H₁₆N₂O₇。

其合成、纯化工艺均已达到中试实验条件的要求。

2. 药效学研究

2.1 非拉尼特对心血管系统的影响

2.1.1 对犬冠状动脉结扎造成心肌梗塞模型的治疗作用

非拉尼特灌胃给药可显著降低犬冠脉结扎后心肌缺血的程度，缩小心肌缺血的范围，作用强度与剂量有一定的关系；定量组织学检测结果与心外膜电图测定结果一致，与对照组比较，非拉尼特可显著减小梗塞范围。非拉尼特还能显著降低犬冠脉结扎后血清乳酸、肌酸激酶及游离脂肪酸升高的程度；显著降低全血ATP降低的程度，提示其可减轻心肌缺血时的细胞损害，对心肌细胞有保护作用。

2.1.2 对麻醉犬血流动力学的影响

非拉尼特对麻醉犬心率（HR）、收缩压（BPs）、舒张压（BPd）、平均动脉压（MAP）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张压LVDP（KPa）、左心室收缩压最大变化速率（±dp/dtmax）、左心室舒张末期压（LVEDP）均没有明显的影响。在治疗剂量范围内，对麻醉犬的血液动力学指标没有明显影响。

2.1.3 对麻醉犬心肌耗氧量的影响

实验结果表明非拉尼特可明显增加麻醉犬冠脉流量，明显降低心肌氧摄取率；显著降低心肌耗氧量，对心输出量、总外周阻力、冠脉阻力、心博出量、心脏指数、心博指数均无明显影响。

2.1.4对结扎冠状动脉所致大鼠心肌缺血再灌注影响

合心爽（地尔硫卓片）为阳性对照，测定大鼠的心梗性能指标。结果表明非拉尼特组的药效略高于合心爽组。

2.1.5对结扎冠状动脉所致离体大鼠心肌缺血的影响

以硝苯地平片为阳性对照，测定非拉尼特对缺血再灌注后的心肌梗塞程度、血流动力学及心肌酶的影响。结果表明非拉尼特组缺血再灌注所致心肌梗塞程度有明显减轻，能有效改善心脏功能，再灌注后心脏左室收缩压降低，左室压差增高，细胞心肌酶漏出减少，与阳性组作用相近，与模型组比较有显著性差异。

2.1.6非拉尼特对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

以以硝苯地平为阳性对照，结果表明，非拉尼特可以显著减轻缺氧复氧导致的乳鼠心肌细胞损伤，与硝苯地平药效相近。

2.2 非拉尼特对血小板聚集的影响

2.2.1 小鼠出血时间测定 结果显示单次及重复给药非拉尼特均明显延长小鼠的出血时间。

2.2.2 动静脉旁路血栓测定 大鼠单次口服给药后1小时测定血栓，计算血栓抑制的百分率。结果非拉尼特明显抑制血栓的形成，而且呈现明显的量效关系。

2.2.3 静脉注射血小板聚集诱导剂测定死亡率 小鼠单次口服给药后0.5小时尾静脉注射ADP溶液0.2ml，观察呼吸窘迫和15min内死亡率，结果非拉尼特组死亡率均低于阴性对照组，呈现明显的量效关系。

3.1 急性毒性试验

非拉尼特以最大给药剂量经灌胃（6.0g/kg）和腹腔注射（1.0g/kg）两种途径给予小鼠，动物均未死亡，但有明显的中毒症状，主要表现为上眼睑下垂、闭目、俯卧安静，呈昏睡状，24小时后，症状基本消失。实验结果表明小鼠灌胃和腹腔注射非拉尼特的最大耐受量分别为6.0g/kg和1.0g/kg。

3.2 长期毒性试验

3.2.1 犬长期毒性试验

设非拉尼特原料药14、56和224mg·kg-13个剂量组，各剂量相当于人拟用剂量的10、40和160倍。另设空白对照1组，每组6只Beagel犬，雌雄各半，口服给药180天。

结果未见动物有明显中毒反应情况。试验期间未发生动物死亡。各组动物药后体重增长无显著性差别。14和56mg·kg-1组动物的血液学、生化检验、电解质、凝血四项及尿十项指标与空白对照组相比较无显著性差异。224mg·kg^-1组的个别指标（WBC、GOT、TT）与空白对照组比较出现统计学差异，但在恢复期结束时此差异消失。Beagle犬各脏器均未见到毒性组织病理学改变。

结论：非拉尼特224mg·kg^-1组的个别生化指标与空白对照组比较有统计学差异。56mg·kg^-1和14mg·kg^-1剂量组对Beagle犬未见与给药有关的毒性表现。在相当于人拟用剂量10～40倍时对Beagle犬无毒性作用。安全剂量为56mg·kg^-1。

3.2.2 大鼠长期毒性试验

设非拉尼特30、120和480·kg^-1  3个剂量组，各剂量相当于人拟用剂量的21、86和343倍。另设溶剂对照1组，每组40只Wistar大鼠，雌雄各半，灌胃180天。

结果未见动物有明显中毒反应情况。试验期间未见动物死亡。各组动物药后食耗及体重增长无显著性差别。120和30mg/kg组动物的血液学、生化检验、电解质、凝血四项及尿十项指标与溶剂对照组相比较无显著性差异。480mg/kg组的个别指标（TBIL、GLU）与溶剂对照组比较出现统计学差异。大鼠等脏器均未见到毒性组织病理学改变。480mg·kg^-1组多数动物出现以中央静脉为中心的病变，肝细胞索轻度变窄，肝细胞水样变性、点状肝细胞坏死。120mg·kg^-1组个别动物出现同样病变。这种肝细胞损伤是可以恢复的。其他脏器均未见到毒性组织病理学改变。30mg·kg^-1组大鼠未见异常。

结论：非拉尼特高剂量（480mg·kg^-1，相当于人拟用剂量343倍）时中毒的靶器官为肝脏。在相当于人拟用剂量21倍时对大鼠未见毒性作用。安全剂量为30mg·kg^-1。

3.3 致突试验

3.3.1 沙门氏菌诱变性试验

用沙门氏菌诱变性试验检测了非拉尼特的致突变性，结果显示，非拉尼特在0.1～5000.0μg/ml血浓度范围内，无论有无S9活化系统，均不诱发测试菌株TA97、TA98、TA100、TA102的回变菌落数增加。表明非拉尼特在本试验条件下对沙门氏菌无致突变性。

3.3.2 CHL细胞染色体畸变试验

本实验检测了非拉尼特对CHL细胞（中国仓鼠肺细胞）染色体的致畸变作用。实验结果表明，在S9活化和非活化条件下，非拉尼特对CHL细胞染色体均未显示致畸变作用。
3.3.3 小鼠骨髓细胞微核试验

本试验旨在了解非拉尼特对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的影响，实验分时效和量效关系两大组进行。时效关系研究中，小鼠以5g/kg灌胃非拉尼特后12、24、36、48、72小时，骨髓嗜多染红细胞微核率与溶剂对照相比均无明显改变（P>0.05，Dunnett t检验）。小鼠灌胃非拉尼特24小时后，骨髓嗜多染红细胞微核率与溶剂对照相比均无明显增加(P>0.05，Dunnett t检验)。表明在本实验条件下，非拉尼特不诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率增加。

3.4大鼠致畸敏感期毒性试验

将受精鼠分为5组，即3个剂量组，1个溶剂对照组，1个阳性对照组。3个剂量组的给药剂量分别为36mg·kg^-1、180mg·kg^-1及900mg·kg^-1,各相当于人拟用剂量的24、120和600倍。阳性对照组为环磷酰胺，给药剂量7mg·kg^-1。参照《新药（西药）临床研究指导原则汇编》中的有关内容，检测指标包括孕鼠的一般状况、体重变化，胎鼠外观、骨骼及内脏检查等。

结果显示：(1)溶剂对照组未见母体毒性作用，未见胎鼠畸形及其它胚胎毒性；环磷酰胺阳性对照组胎鼠身长、尾长缩短、体重减轻、外观畸形率及骨骼畸形率增高，对大鼠呈现明显胚胎毒性和致畸胎作用，表明本次试验选用的动物种属对致畸物反应敏感，结果可靠。(2)在致畸敏感期大鼠灌胃非拉尼特，给药剂量分别为36mg·kg^-1、180mg·kg^-1未见母体毒性。当给药剂量900mg·kg^-1时， 影响母鼠体重增长，对胎鼠生长发育有一定影响，主要表现为胎鼠平均体重低，身长短；该剂量相当于人临床拟用剂量600倍。(3)在致畸敏感期大鼠灌胃非拉尼特，给药剂量分别为36mg·kg^-1、180mg·kg^-1及900mg·kg^-1时，未见胎鼠外观、骨骼及内脏畸形。

4．原料药的药代动力学

进行了大鼠血药浓度-时间曲线，各组织的分布、血浆蛋白结合试验、排泄试验、结构转化试验。

5. 制剂研究

5.1剂型：根据非拉尼特原料药特性，经过筛选，最终选定制成非拉尼特片剂。片剂为白色薄膜包衣普通片。直径为7mm，重量为120mg，含药量为50mg。外观光洁平整。片剂采用湿法制粒，工艺简单，且易于工业化生产，污染小。

5.2各项指标：

5.2.1硬度：硬度测定值为45N。硬度适中。

5.2.2脆碎度：脆碎度测定仪测定脆碎度失重率为0.15%，符合脆碎度要求。

5.2.3崩解时限：非拉尼特片剂崩解时间为1.8分钟，符合在15分钟内完全崩解的要求。

5.2.4溶出度：溶出度测定采用桨法，50转/分，溶出介质为0.2%的十二烷基硫酸钠溶液。在45分钟时，溶出量为标示量的99%。

5.2.5含量测定：采用HPLC的方法进行含量测定，含量达99%以上。

5.2.6稳定性：检查了非拉尼特片在光照、温度、湿度条件下5、10、15天后含量和溶出度的变化。以10天时含量和溶出度的变化为例，在光照、温度、湿度条件下，含量分别下降：1.17%，3.40%，1.53%；溶出度分别下降：0.68%，0.18%，3.70%。均符合要求。

5.3制备工艺：

针对原料药难溶的特性，采用首先将原料药微粉化再进行制粒的方法，微粉化后再制粒大大提高了片剂的溶出度。解决了难溶性药物需要解决的根本问题。

5.5包装材料：选定先进的防光、防潮包装。确保药物的稳定性及疗效。

（二）、正在进行的项目

继续制剂长期稳定性的考察。

（三）项目优势

1.非拉尼特合成简单、容易，中间步骤少，所需原料常见，易于工业大生产。

2.药理作用强，起效快，作用持续时间长。

3.毒性低 未见与给药有关的毒性表现。

4.有发展前景 目前该药为普通片，今后可以向速释、缓释、帖剂、喷雾剂等方面发展。

（四）、预期结果、寻求合作

本项目预计至2005年将按照国家关于一类创新药物的研究技术要求全部完成，并申报一类新药的临床研究。我们愿与有关的生产厂家、研究单位合作，共同开发非拉尼特，使其早日推向生产，造福人类。

　我所相关新药转让品种：

　★可舒胶囊

　★丁螺环酮贴剂

  ★葛枳护肝胶囊